蛋白质样品—质谱鉴定分析

  • 蛋白质鉴定是LC-MS的基本应用,即利用质谱完成对样品中未知蛋白质的鉴定/定量分析。

  • 蛋白质LC-MS鉴定推荐Co-IP、pull-down等方法纯化/富集的蛋白质复合物,及其他复杂度低的蛋白质样品,如外泌体蛋白(exosome protein)等。

  • 样本类型主要分为3类:

  • 胶条:考马斯亮蓝染色 (如MGR01:考马斯亮蓝染色) 染色的SDS-PAGE胶条(不推荐银染染色(Silver staining)的胶条 (蛋白质含量太低,质谱前处理和质谱鉴定结果不理想)。

    • 溶液:如Co-IP富集的蛋白质溶液样本 。

      • Beads:Co-IP/pull-down富集蛋白质的beads (Magnetic beads 或 Agarose beads)。

      • 用户只需提供样品即可,我方完成:(1)样品前处理(酶解生成肽段),(2) 肽段除盐和荧光法精准定量 ,(3)肽段LC-MS(液相色谱-质谱联用)检测,(4)质谱文件检索,完成蛋白质鉴定(定量)等分析,(5)提供完整的英文实验流程,直接用于学术文章提交。


      谱璟科技的Protein ID技术流程


      • 样品前处理:

      1. 对于考染胶条样本:

        对考染的SDS-PAGE胶条进行(1)脱色、(2)脱水干燥、(3)trypsin 酶解、(4) 肽段提取及冻干、(5)肽段重悬及除盐、(6)除盐肽段荧光法定量(Thermo, #23290)、(7)定量后的除盐肽段冻干。

      2. 对于溶液或beads样本:

        对溶液或beads进行(1)还原、(2)烷基化、(3)trypsin 酶解、(4) 肽段提取及除盐,(5)除盐肽段荧光法定量、(6)定量后的除盐肽段冻干。


      • 肽段质谱检测:

      质谱名称质谱类型质谱数据采集方式
      TIMS TOF4D 质谱DDA
      Orbitrap Astral4D 质谱DDA


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