“靶”蛋白翻译后修饰 (PTMs) — 质谱分析

简介:

  • 在不同的生理和病理状态下,蛋白质翻译后修饰(Protein Post-translational Modifications, PTMs)通常呈现不同的状态,从而发挥多样的调控功能。PTMs种类和功能多样,通常一个蛋白质分子上可同时存在多种不同的PTMs。

  • 质谱是目前常用的、进行PTMs筛选的高通量技术。常规的实验流程是用特定的PTMs抗体(比如乙酰化抗体、甲基化抗体等)或化学材料(如TiO2实现对磷酸化肽段富集)通过免疫沉淀(IP,Immunoprecipitation)/pull-down富集有特定PTMs修饰的肽段/蛋白质后,再进行质谱检测和分析,从“泛”的层面,筛选(1)发生特定PTM修饰的蛋白质(蛋白质种类鉴定),(2)特定PTMs修饰在蛋白质的那些氨基酸上(位点鉴定)。然而,该技术流程有其缺陷,体现在(1)商业化的、高亲和力的PTMs抗体种类有限,不是所有的PTMs类型都有相应的抗体。(2)数据的假阳性问题。

  • 另一种策略是聚焦研究的靶蛋白(Bait Protein),利用免疫沉淀(IP)高效富集靶蛋白后结合质谱检测和分析,解析靶蛋白上可能存在的PTMs,从而为深入解析靶蛋白PTMs对生理/病理的调控机理。

  • 谱璟科技基于其在IP-MS和SILAC-IP-MS上的技术积累,可实现对靶蛋白上潜在PTMs类型和修饰状态的深入解析。


技术流程:

SILAC-IP-MS流程图


实验数据:

Bait-PTMs


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